杨鹏远课题组建立基于我国c2亚型代表株的hbv复制细胞工具
来源：生物物理研究所|发布时间：2022-02-25|【 】
2022年2月24日，中科院生物物理研究所杨鹏远课题组在《parmacological research》杂志发表题为"establishment of an inducible cell line for hepatitis b virus genotype c2 and its pharmacological responses to interferons"的研究论文，构建了针对我国c2亚型hbv复制细胞系，填补了c2亚型hbv机制研究及其药物筛选稳定细胞工具的缺乏。
乙肝病毒（hepatitis b virus, hbv）感染易导致慢性乙型肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌等，严重损害患者生命健康，造成沉重的经济和社会负担。全球约有2.57亿慢性乙肝感染者，其中大约三分之一在中国。hbv进化过程中由于基因组突变累积形成9个基因型（a型到i型）和1个准基因型（j型），各基因型又包含多种亚型。研究人员基于对ncbi数据库中我国提交的hbv全基因组序列统计，发现65.2%的毒株为c型，其中c2亚型占大多数。根据相关临床报道，c型hbv比a型和d型易导致慢性感染和肝纤维化，致癌能力强，且对干扰素等药物响应差；其中，c2亚型hbv在青少年患者中表现出更高程度的肝炎、肝纤维化和肝损伤。但是，目前实验室常用hbv复制细胞工具均基于欧美国家流行的d型hbv构建，尚缺乏针对c2型病毒的hbv复制稳定细胞工具。
研究人员对1449条分离自我国的hbv全基因组公开序列进行分析，综合考虑基因型、血清型、特征性突变位点等信息，选出17.3株作为我国c2亚型hbv的代表性基因组序列，利用tet-off诱导表达系统将包含前基因组序列的1.05× hbv整合入hepg2细胞，筛选建立了hepg2-17.3细胞系。该细胞系稳定表达分泌hbsag抗原，诱导后表达分泌hbeag抗原，利用c2亚型pres1 n端特异序列检测分泌的hbv dna滴度在3×105 copies/ml，并且验证了rcdna-cccdna的复制循环。在评价hepg2-17.3细胞系对临床一线药物的响应情况中发现i型干扰素和ii型干扰素联用比单用可获得更好的抗病毒效果，且干扰素处理后isg分子（已报道可发挥抗hbv作用）激活情况与d型hbv复制细胞显著不同。因此，hepg2-17.3细胞的建立为针对c2亚型hbv基因型特点进行病毒机制及治疗药物研究提供了有力工具。
图 1. 可诱导c2型hbv稳定细胞系构建流程图
中国科学院生物物理所杨鹏远研究员为本文通讯作者。杨鹏远组姜韶东博士，王欣博士为本文共同第一作者。该研究得到中国科学院和国家自然科学基金委的经费支持。
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（供稿：杨鹏远研究组）
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